Invitrogen™ Alexa Fluor™ 594 C ₅ Maleimid

Alexa Fluor™ 594 er et lyst, rødt fluorescerende farvestof, der kan exciteres ved hjælp af 561 nm eller 594 nm laserlinjer. Anvendes til stabil signalgenerering i billeddannelse og flowcytometri, Alexa Fluor™ 594 farvestof er vandopløseligt og pH-ufølsomt fra pH 4 til pH 10. Ud over reaktive farveformuleringer tilbyder vi Alexa Fluor™ 594 farvestof konjugeret til en række antistoffer, peptider, proteiner, sporstoffer og amplifikationssubstrater optimeret til cellulær mærkning og påvisning.

Maleimidderivatet af Alexa Fluor™ 594 er det mest populære værktøj til at konjugere farvestoffet til en thiolgruppe på et protein, oligonukleotid thiophosphat eller ligand med lav molekylvægt. Det resulterende Alexa Fluor™ 594-konjugater udviser lysere fluorescens og større fotostabilitet end konjugaterne af andre spektralt lignende fluoroforer.

Detaljeret information om dette AlexaFluor™ maleimid:

Fluorofor etiket: Alexa Fluor™ 594 farvestof
Reaktiv gruppe: maleimid
Reaktivitet: thiolgrupper på proteiner og ligander, oligonukleotid thiophosphater
Ex/Em af konjugatet: 588/612 nm
Ekstinktionskoefficient: 96.000 cm-1M-1
Spektralt lignende farvestoffer: Texas Red
Molekylvægt: 908,97

Typisk konjugationsreaktion
Proteinet skal opløses i en koncentration på 50-100μ M i en passende buffer (10-100 mM phosphat, Tris eller HEPES) ved pH 7,0-7,5. I dette pH-område er proteinthiolgrupperne tilstrækkeligt nukleofile til, at de næsten udelukkende reagerer med reagenset i nærværelse af de mere talrige proteinamingrupper, som er protonerede og relativt ureaktive. Vi anbefaler at reducere eventuelle disulfidbindinger på dette tidspunkt ved at bruge et 10 gange molært overskud af reduktionsmiddel såsom DTT eller TCEP. Overskydende DTT skal fjernes ved dialyse, og efterfølgende thiol-modifikation bør udføres under oxygenfrie betingelser for at forhindre reformation af disulfidbindingerne; disse forholdsregler er ikke nødvendige ved anvendelse af TCEP før maleimidkonjugering.

De Alexa Fluor™ maleimid opløses typisk i vandfrit dimethylsulfoxid af høj kvalitet (DMSO) i en koncentration på 1-10 mM umiddelbart før brug, og stamopløsninger bør beskyttes mod lys så meget som muligt. Generelt tilsættes denne stamopløsning til proteinopløsningen dråbevis under omrøring for at producere ca. 10-20 mol reagens pr. mol protein, og reaktionen får lov at forløbe ved stuetemperatur i 2 timer eller ved 4 C natten °over, beskyttet mod lys. Ethvert uomsat thiol-reaktivt reagens kan forbruges ved at tilsætte overskydende glutathion, mercaptoethanol eller anden opløselig lavmolekylær thiol.

Konjugatrensning
Mærkede antistoffer er typisk adskilt fra frie Alexa Fluor™ farve ved hjælp af en gelfiltreringskolonne, som f.eks Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 eller tilsvarende. For meget større eller mindre proteiner vælges et gelfiltreringsmedium med en passende molekylvægtsgrænse eller oprensning ved dialyse. Vi tilbyder flere oprensningssæt optimeret til forskellige mængder antistofkonjugat:
Antistofkonjugatoprensningskit til 0,5-1 mg (kat.nr. A33086)
Antistofkonjugatoprensningskit til 20-50μ g (Kat. nr. A33087)
Antistofkonjugatoprensningskit til 50-100μ g (Kat. nr. A33088)

Lær mere om protein- og antistofmærkning
Vi tilbyder et bredt udvalg af Molecular Probes™ antistof- og proteinmærkningssæt, der passer til dit udgangsmateriale og din eksperimentelle opsætning. Se vores Labeling Chemistry Selection Tool for andre valg. For at lære mere om vores mærkningssæt, læs sæt til mærkning af proteiner og nukleinsyrer —afsnit 1.2 i Molecular Probes™ Håndbog.

Vi ’laver et skræddersyet konjugat til dig
Hvis du ’ikke kan finde det, ’du leder efter, i vores onlinekatalog, vil vi ’forberede et tilpasset antistof eller proteinkonjugat til dig. Vores tilpassede konjugationsservice er effektiv og fortrolig, og vi står ved kvaliteten af vores arbejde. Det er vi ISO 13485:2000 certificeret.