Molecular Probes™ Alexa Fluor™ 488 TFP ester

Alexa Fluor™ farvestoffer er reaktive molekyler, der kan bruges til at tilføje et fluorescerende mærke til de primære aminer (R- _NH2 ) af proteiner, aminmodificerede oligonukleotider og andre aminholdige molekyler. Det resulterende Alexa Fluor™ konjugater udviser lysere fluorescens og større fotostabilitet end konjugaterne af andre spektralt lignende fluoroforer. Alexa Fluor™ 488 TFP-ester producerer et konjugat med excitation/emission på 495/515 nm, der spektralt ligner fluorescein (FITC) og Cy2 konjugater.

Alexa Fluor™ farvestoffer er tilgængelige med fluorescensemissioner, der spænder over det synlige og nær-infrarøde spektrum (se Alexa Fluor™ Dye Series Note 1.1 —i The Molecular Probes™ Håndbog) og giver den unikke kombination af vandopløselighed og pH-ufølsomhed mellem pH 4 og 10 for kompatibilitet i forskellige biologiske miljøer.

TFP (tetrafluorphenyl) estere er en forbedring i forhold til succinimidylester (SE eller NHS-ester) kemien, der typisk bruges til at binde fluoroforer eller haptener til de primære aminer i biomolekyler. Begge reaktive kemier producerer den samme stærke amidbinding mellem farvestoffet eller haptenet og forbindelsen af interesse, men TFP-estere er mindre modtagelige for spontan hydrolyse under konjugeringsreaktioner. Alexa Fluor™ TFP-estere er stabile i adskillige timer ved den basiske pH-værdi, der typisk bruges til –reaktioner, der er langt længere end succinimidylestere.

Typisk konjugeringsreaktion
Du kan konjugere aminreaktive reagenser med praktisk talt ethvert protein eller peptid; den medfølgende protokol er optimeret til IgG-antistoffer. Du kan skalere reaktionen for enhver mængde protein, men koncentrationen af proteinet bør være mindst 2 mg/ml for at opnå optimale resultater. Vi anbefaler at prøve tre forskellige grader af mærkning ved at bruge tre forskellige molære forhold mellem det reaktive reagens og protein.

De Alexa Fluor™ TFP-ester opløses typisk i vandfrit dimethylsulfoxid af høj kvalitet (DMSO) (D12345), og reaktionen udføres i 0,–1 0,2 M natriumbicarbonatbuffer, pH 8,3, ved stuetemperatur i 1 time. Fordi pKa af den terminale amin er lavere end for lysinepsilon-aminogruppen, kan du opnå mere selektiv mærkning af aminterminalen ved at bruge en buffer tættere på neutral pH.

Konjugatoprensning Mærkede antistoffer
er typisk adskilt fra frie Alexa Fluor™ farve ved hjælp af en gelfiltreringskolonne, som f.eks Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 eller tilsvarende. For meget større eller mindre proteiner, vælg et gelfiltreringsmedium med en passende molekylvægtsgrænse eller oprens ved dialyse.

Lær mere om protein- og antistofmærkning Vi
tilbyder et bredt udvalg af Molecular Probes™ antistof- og proteinmærkningssæt, der passer til dit udgangsmateriale og din eksperimentelle opsætning. Se Antistofmærkning fra A til Z eller brug vores værktøj til valg af mærkningskemi for andre valg. For at lære mere om vores mærkningssæt, læs sæt til mærkning af proteiner —og nukleinsyrer afsnit 1.2 i Molecular Probes™ Håndbog.

Vi ’laver et tilpasset konjugat til dig
Hvis du ’ikke kan finde ’det, du leder efter i vores onlinekatalog, vil ’vi forberede et tilpasset antistof- eller proteinkonjugat til dig. Vores tilpassede konjugationsservice er effektiv og fortrolig, og det er vi ISO 13485:2000 certificeret.